免疫学杂志 /oa &nbsp;索曲妥林对人T细胞产生细胞因子抑制作用的机制研究 /oa/darticle.aspx?type=view&id=20190601 &nbsp;目的 观察索曲妥林(sotrastaurin或AEB071)对人外周血中单个核细胞(PBMCs)、纯化CD4+T 细胞和CD8+T 细胞分泌细胞因子的抑制作用及其机制。方法 采集健康志愿者的静脉血,肝素抗凝,密度梯度离心法分离PBMCs后纯化CD4+T和CD8+ T细胞,应用抗CD3抗体联合CD28抗体进行刺激,加或不加入AEB071培养后,检测细胞因子的产生、转录因子的表达和细胞的活化与增殖。 结果 索曲妥林处理不促进外周血T细胞的凋亡,而能抑制T细胞分泌细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2,且呈时间和剂量依赖性;进一步研究发现,索曲妥林通过下调STAT-1和STAT-4的磷酸化以及T-bet的表达抑制细胞因子的产生。同时经研究发现,索曲妥林处理后抑制T细胞的活化和增殖。结论 索曲妥林抑制T细胞转录因子的表达与磷酸化而抑制细胞因子的产生,从而抑制人体免疫功能。为此,进一步研究索曲妥林免疫抑制的机制,对索曲妥林在器官移植、银屑病和溃疡性结肠炎的治疗方面的应用,具有参考价值。 2019年06月01 00:00 2019年06期 461 3327892 &nbsp;金水平,吴琼丽,康双朋,等 &nbsp;CVA10候选疫苗病毒株的分离、鉴定及其致病性和免疫保护性研究 /oa/darticle.aspx?type=view&id=20190602 &nbsp;目的 分离、筛选柯萨奇病毒A组10型(Coxsackievirus A10,CVA10)病毒候选疫苗株,并对其免疫原性及免疫保护性进行评价,为CVA10疫苗的研制奠定基础。方法 本研究从北京市儿童医院、军事医学研究院、北京市疾控中心共收集80个手足口病(hand foot and mouth disease,HFMD)标本,通过细胞培养法、RT-PCR的方法分离、鉴定CVA10病毒株。对病毒进行嗜斑纯化,各纯化病毒株与Al(OH)3(0.5 g/ml)佐剂混合后制备原疫苗,免疫Balb/c小鼠,收集血清。应用交叉中和实验及抗体阳转率实验筛选候选CVA10疫苗株。筛选后T9疫苗株免疫ICR乳鼠,观察ICR乳鼠的致病情况。结果 共分离出14株CVA10病毒株。交叉中和实验筛选得到4株候选疫苗株。最后阳转率实验确定T9为候选疫苗株。Al(OH)3+CVA10灭活抗原在Balb/c小鼠体内能诱生高滴度的特异性抗体,该抗体对Balb/c小鼠有保护作用。T9病毒免疫ICR乳鼠后,对乳鼠完全致死。结论 筛选1株CVA10病毒候选疫苗株,CVA10候选疫苗对ICR乳鼠动物模型有致病性。 2019年06月01 00:00 2019年06期 471 3409180 &nbsp;仝 凯,段越强,赵忠鹏,等 &nbsp;Annexin A2单克隆抗体抗肿瘤活性的实验研究 /oa/darticle.aspx?type=view&id=20190603 &nbsp;目的 研究人膜联蛋白A2(Annexin A2)单克隆抗体的抗肿瘤活性,探讨Annexin A2在肿瘤发生发展中的作用。方法 表达纯化Annexin A2重组蛋白,免疫小鼠及细胞融合制备单克隆抗体,用间接ELISA检测抗体的效价,Western blot和免疫共沉淀检测抗体的特异性。MTT法检测外源性Annexin A2抗体对肿瘤细胞生长的影响,流式细胞术检测其对肿瘤细胞周期的影响,RT-PCR及Quantitative real-time PCR检测对肿瘤细胞周期相关基因的影响,transwell检测其对HepG2细胞的侵袭及迁移的影响。结果 Annexin A2重组蛋白免疫小鼠,获得效价高的单克隆抗体。MTT结果显示,与对照细胞相比,外源抗体能够抑制HepG2细胞的生长。细胞周期相关检测结果显示,Annexin A2蛋白的表达与肿瘤细胞的生长周期相关基因具有相关性。transwell结果显示,外源抗体的处理抑制HepG2细胞的迁移,但促进了HepG2细胞的侵袭。结论 Annexin A2重组蛋白免疫Balb/c小鼠后,获得高滴度特异性的单克隆抗体。获得的Annexin A2单克隆抗体具有抑制生长迁移作用,为肿瘤的诊断及治疗提供了实验依据。 2019年06月01 00:00 2019年06期 478 4479632 &nbsp;陈 赛,聂纪芹,李 聪,等 &nbsp;槲皮素通过抑制NF-κB减弱类风湿关节炎大鼠软骨细胞基质降解和细胞凋亡 <br /> /oa/darticle.aspx?type=view&id=20190604 &nbsp;目的 探讨槲皮素(quercetin,Quer)对NF-κB活性的影响及对类风湿关节炎大鼠软骨细胞基质降解和细胞凋亡的作用。方法 建立Ⅱ型胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠模型,设立CIA模型组、Quer治疗组并以正常大鼠作为对照组,比较各组大鼠AI指数和足趾容积;ELISA检测关节腔液中IL-1β、MMP-13含量;Western blot检测关节软骨组织中p-p65、MMP-13蛋白的表达。体外培养大鼠软骨组织细胞,分为control组、IL-1β处理组,检测软骨组织培养液中MMP-13、Hyp和蛋白多糖含量。将体外培养的软骨细胞分为3组:control组、IL-1β组、IL-1β+Quer组,检测软骨细胞内p-p65、MMP-13、COL2A1蛋白表达,流式检测细胞凋亡。结果 与control组相比,CIA组大鼠AI指数和足趾容积明显增加,关节腔液中IL-1β、MMP-13含量以及软骨组织中p-p65、MMP-13蛋白表达明显增加;给予Quer治疗可显著降低大鼠的AI指数和足趾容积,使软骨组织内p-p65、MMP-13蛋白表达量明显减少,关节腔液中IL-1β、MMP-13含量明显降低。IL-1β处理可明显升高软骨组织培养基中MMP-13、Hyp含量,使蛋白多糖含量明显减少。IL-1β处理明显上调软骨细胞内p-p65、MMP-13蛋白表达,使COL2A1蛋白表达明显减少,软骨细胞凋亡明显增加;给予Quer处理则明显抑制软骨细胞内p-p65、MMP-13蛋白表达,使COL2A1表达量增加,细胞凋亡明显减少。结论 Quer可通过抑制NF-κB激活,减弱炎症环境下软骨细胞内MMP-13产生、基质降解和细胞凋亡,起到保护软骨的作用。 2019年06月01 00:00 2019年06期 485 1140830 &nbsp;王友庆,陈士芳,梅 珏 &nbsp;细粒棘球蚴早期感染对小鼠T细胞亚群的影响 /oa/darticle.aspx?type=view&id=20190605 &nbsp;目的 观察细粒棘球蚴感染早期,小鼠体内脾细胞中T细胞亚群及相关细胞因子表达的改变。方法 以细粒棘球蚴感染Balb/c小鼠后收集细胞用FCM检测Th1、Th2、 Treg、Th9 细胞; 同时用qRT-PCR检测IL-9、IL-10、IFN-γ、IL-4、PU.1和TGF-β的mRNA水平表达量;用ELISA 检测血清中IL-9、IL-10、IFN-γ、IL-4、TGF-β和IL-25的含量。结果 FCM 检测原头蚴组不同时间点Th1、Th2、 Treg、Th9 细胞的比例,差异均有统计学意义(<em>P</em>&lt;0.05);qRT-PCR 检测IL-9、IL-10、IFN-γ、IL-4、PU.1和TGF-β 的mRNA水平表达量在感染后升高,与对照组相比差异有统计学意义(<em>P</em>&lt;0.05);ELISA 检测血清中IL-9、 IL-10、IFN-γ、IL-4、TGF-β和IL-25的含量在感染后升高,与对照组相比差异有统计学意义(<em>P</em>&lt;0.05)。结论 原头蚴能刺激小鼠体内脾细胞向 Th1、Th2、 Treg、Th9 细胞分化且上调相应细胞因子的分泌,且Th9与Th2、 Treg之间呈正相关,提示这些亚群细胞可能在包虫病感染的免疫逃逸中发挥一定作用。 2019年06月01 00:00 2019年06期 492 1572107 &nbsp;廖振宇,方海瑞,蒋红群,等 &nbsp;脂肪间充质干细胞通过激活EZH2促进卵巢癌的增殖及侵袭 /oa/darticle.aspx?type=view&id=20190606 &nbsp;目的 探讨脂肪间充质干细胞是否通过调节EZH2的表达促进卵巢癌细胞生长、侵袭及迁移。方法 体外分离、培养健康人大网膜脂肪间充质干细胞并制备脂肪间充质干细胞条件培养基(ADSCs-CM),建立EZH2shRNA稳定转染的卵巢癌细胞系。条件培养基处理稳定转染及未转染的卵巢癌细胞,实时定量PCR及Western blot免疫印迹法检测2组细胞中EZH2 mRNA及蛋白的表达差异,CCK-8方法及Transwell培养体系检测条件培养基对2组卵巢癌细胞增殖及侵袭能力的影响。结果 条件培养基处理后的卵巢癌细胞较普通培养基培养的卵巢癌细胞EZH2表达显著升高,并伴随增殖及侵袭能力的增强;我们通过shRNA沉默卵巢癌细胞中的ezh2基因,建立稳定转染的卵巢癌细胞系,再用条件培养基处理EZH2shRNA稳定转染的卵巢癌细胞,处理后EZH2表达较未转染细胞未见明显升高,说明siRNA成功抑制细胞系中EZH2的表达。CCK-8检测和Transwell侵袭实验结果表明,稳定转染的卵巢癌细胞经条件培养基处理后,脂肪干细胞条件培养基对卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力的促进作用消失。结论 人脂肪间充质干细胞可能通过调节卵巢癌细胞中EZH2的表达对卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力起促进作用。 2019年06月01 00:00 2019年06期 499 1549288 &nbsp;尤 敏,王福玲,王雅琦,等 &nbsp;IL-31在哮喘小鼠中的动态表达及对肺泡上皮细胞表达CCL11和CCL22的影响 <br /> /oa/darticle.aspx?type=view&id=20190607 &nbsp;目的 通过观察IL-31在OVA诱导小鼠哮喘模型中的动态表达及IL-31对肺泡上皮细胞表达趋化因子CCL11和CCL22的影响,探讨IL-31在哮喘气道炎症中的作用。方法 常规OVA法建立小鼠哮喘模型,于末次激发后取肺组织HE染色及AB-PAS染色,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)进行白细胞和嗜酸性粒细胞(EOS)计数,ELISA法检测血浆中IgE、IL-4、IFN-γ、IL-31水平,荧光定量PCR检测肺组织IL-31R mRNA表达水平,同时体外培养小鼠肺泡上皮细胞,用IL-31处理24 h后检测CCL11和CCL22 mRNA的表达水平。结果 成功构建哮喘小鼠模型,哮喘小鼠BALF中白细胞总数、嗜酸性粒细胞百分比和血浆中IgE水平明显增多。哮喘小鼠肺组织病理切片见中性粒细胞、EOS浸润。哮喘小鼠血浆中Th2类细胞因子IL-4水平明显高于对照组,Th1类细胞因子IFN-γ明显低于对照组。哮喘小鼠血浆IL-31水平和肺组织IL-31R mRNA表达水平明显增高,第2周至第8周虽略有降低但仍明显高于对照组。IL-31作用小鼠肺泡上皮细胞24 h后,趋化因子CCL11、CCL22 mRNA表达增高。结论 IL-31通过刺激趋化因子表达募集炎性细胞,促进气道炎症的发生发展。 2019年06月01 00:00 2019年06期 507 1830841 &nbsp;刘福慧,高 婧,江 涛,等 &nbsp;1例ILFS2患儿临床与免疫学特征研究 /oa/darticle.aspx?type=view&id=20190608 &nbsp;目的 探讨1例由NBAS(neuroblastoma amplified sequence,NBAS)基因缺陷导致的婴儿肝功能衰竭综合征2型(infantile liver failure syndrome 2,ILFS2)患儿的临床特征、免疫表型、诊疗措施并总结相关文献报道。方法 对1例临床表现为反复发热伴急性肝功能衰竭患儿行免疫学初筛、免疫相关基因测序、外周血涂片找P-H细胞;淋巴细胞各亚群分析及增殖功能、NK细胞免疫功能评估。总结已报道NBAS基因缺陷导致ILFS2患儿的临床特征、免疫学表型及诊疗方法。结果 1)确诊1例NBAS基因复合杂合变异致ILFS2患儿(c.[6751_6754delCTCC]、c.[3596-G&gt;A]),外周血涂片可见典型Pelger-Hu&euml;t细胞,患儿NK细胞数量及比率均减少,NK细胞杀伤活性明显降低,淋巴细胞增殖功能无异常。2) 文献检索纳入已报道的22例ILFS2患儿,所有患儿肝内表型均为发热引起反复急性肝功能衰竭(recurrent acute liver failure,RALF),而肝外表型各不相同,如轻微脑萎缩、身材矮小、Pelger-Hu&euml;t细胞阳性、眼距过窄、慢性病毒感染、NK细胞减少、低丙种球蛋白血症等。结论 确诊1例NBAS基因变异致ILFS2患儿,患儿存在NK细胞数量及功能缺陷。ILFS2的确诊依赖临床表现及基因检测,免疫功能筛查亦有助于诊断。早期及时控制体温对于预防及改善预后十分关键。 2019年06月01 00:00 2019年06期 512 3755968 &nbsp;宋雪瑞,陈 智,陈学梅,等 &nbsp;1例CIITA新发突变致MHC-Ⅱ类分子缺陷病的临床与分子特征 /oa/darticle.aspx?type=view&id=20190609 &nbsp;目的 探讨1例CIITA基因突变所致MHCⅡ类分子(major histocompatibility complex classⅡ,MHCⅡ)缺陷病患儿临床与分子特征。 方法 分析1例在重庆医科大学附属儿童医院就诊的MHCⅡ类分子缺陷病患儿的临床资料、实验室检查,Sanger 测序分析患儿CIITA基因序列、PCR法检测T细胞受体长度多样性,流式细胞术检测HLA-DR蛋白表达。结果 患儿,男,2岁2月,3月起病,表现为反复腹泻、呼吸道感染、持续CMV感染、卡介苗病、重度营养不良,IgG、IgA下降、IgM升高,CD4+T细胞比例下降但数量正常、CD4/CD8比例倒置。CIITA基因复合杂合突变,c.3223C&gt;T来源于父亲;c.1240delC来源于母亲,为未报道新发突变。患儿B细胞和单核细胞表面的 HLA-DR表达明显降低,T细胞功能轻度受损。确诊后患儿行单倍体造血干细胞移植,因发生严重的移植物抗宿主病死亡。结论 经临床、免疫学筛查、基因及流式细胞术检测,确诊MHCⅡ类分子缺陷患儿1例,其母源突变c.1240delC既往未见报道。反复多病原感染伴有CD4+细胞比例和(或)数量下降需警惕该病可能,综合临床与实验室检查行MHC-Ⅱ蛋白表达及基因测序可确诊该病,造血干细胞移植是目前根治的唯一办法,但成功率较其他联合免疫缺陷病低。 2019年06月01 00:00 2019年06期 519 4698461 &nbsp;徐祺玲,李亚男,陈学梅,等 &nbsp;5-氟尿嘧啶在HPV阳性宫颈癌细胞凋亡信号通路Wnt/β-catenin中的作用及与T淋巴细胞的相关性 <br /> /oa/darticle.aspx?type=view&id=20190610 &nbsp;目的 探讨5-氟尿嘧啶在促进HPV阳性宫颈癌细胞凋亡的Wnt/β-catenin信号通路中的作用及与T淋巴细胞的相关性。方法 2015年3月至2017年11月山西省汾阳医院收治的HPV阳性宫颈癌患者56例作为对象,所有患者均行手术治疗,术中取病灶组织。采用酶联合消化法体外分离、培养人HPV阳性宫颈癌细胞,将获得的细胞分为对照组、奈达铂组及5-氟尿嘧啶组。采用MTT法测定不同组培养的HPV阳性宫颈癌细胞增殖率;采用免疫印迹法测定3组细胞凋亡的Wnt/β-catenin信号通路水平;采用流式细胞仪测定宫颈癌患者CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+水平;采用SPSS Pearson相关性分析软件对HPV阳性宫颈癌细胞凋亡的Wnt/β-catenin信号通路与T淋巴细胞进行相关性分析。结果 MTT法结果表明奈达铂组及5-氟尿嘧啶组宫颈癌细胞增殖率均低于对照组(<em>P</em>&lt;0.05);5-氟尿嘧啶组宫颈癌细胞增殖率低于奈达铂组(P&lt;0.05);5-氟尿嘧啶组与奈达铂组3组Wnt/β-catenin蛋白表达水平均高于对照组(<em>P</em>&lt;0.05);5-氟尿嘧啶组Wnt/β-catenin蛋白表达水平均高于奈达铂组(<em>P</em>&lt;0.05);宫颈癌患者治疗后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均高于治疗前(<em>P</em>&lt;0.05);宫颈癌患者中治疗后CD8+水平低于治疗前(<em>P</em>&lt;0.05);SPSS Pearson相关性分析结果表明5氟尿嘧啶组HPV阳性宫颈癌Wnt/β-catenin蛋白表达水平与CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平呈正相关性(<em>P</em>&lt;0.05);HPV阳性宫颈癌Wnt/β-catenin蛋白表达水平与CD8+水平呈负相关性(<em>P</em>&lt;0.05)。结论 5-氟尿嘧啶能通过调节Wnt/β-catenin信号通路促进HPV阳性宫颈癌细胞凋亡,与T淋巴细胞存在相关性。 2019年06月01 00:00 2019年06期 526 1158278 &nbsp;文丽芳,丁 洁 &nbsp;TLR8激动剂对胃癌患者树突细胞表型及功能的调节作用 /oa/darticle.aspx?type=view&id=20190611 &nbsp;目的 研究TLR8激动剂对胃癌患者树突细胞体外培养的影响。方法 应用血细胞分离机无菌采集肿瘤患者外周血,实验室分离诱导为树突细胞和T细胞,加入TLR8激动剂处理未成熟的树突细胞刺激成熟。Western blotting检测树突细胞中pNF-κB的表达水平,流式检测树突细胞表面标记分子表达,ELISA检测对照组和激动剂组IL-12、TNF-α的表达水平,树突细胞与自体T淋巴细胞共培养后流式检测T细胞表面标记分子表达。结果 TLR8激动剂刺激后树突细胞中pNF-κB表达增加,树突细胞表面标记HLR-DR、CD11c、CD54、CD80、CD83、CD86分子水平上调,激动剂组IL-12、TNF-α的表达水平升高,共培养后T细胞表面标记CD3、CD28分子无明显变化。结论 TLR8激动剂体外刺激促进胃癌患者的树突细胞成熟,为TLR8激动剂作为树突细胞疫苗佐剂提供证据。 2019年06月01 00:00 2019年06期 532 1455703 &nbsp;孔丹丹,江龙委,李文明,等 &nbsp;单纯疱疹病毒Ⅰ型ICP0蛋白的E3泛素连接酶活性在抑制宿主免疫反应中的作用 /oa/darticle.aspx?type=view&id=20190612 &nbsp;单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)编码的具有泛素连接酶(ubiquitin-ligase enzymes 3,E3)活性的ICP0(infected cell protein 0)蛋白是病毒由潜伏期进入裂解复制期的关键作用蛋白。作为E3泛素连接酶,ICP0能够直接降解多种细胞组分,阻碍细胞多种固有免疫和先天性免疫反应。本文综述了ICP0的E3泛素连接活性在对抗宿主免疫反应中的作用。重点阐述了ICP0在裂解性复制中靶向降解宿主SUMO(small ubiquitin-like modifier)化修饰的抗病毒蛋白、阻碍宿主干扰素抗病毒途径和DNA损伤反应的相关机制。 2019年06月01 00:00 2019年06期 537 1409981 &nbsp;刘文英,王 莉 &nbsp;低剂量IL-2治疗自身免疫性疾病的研究进展 /oa/darticle.aspx?type=view&id=20190613 &nbsp;IL-2是由活化T细胞产生的白介素家族成员之一,可以通过与细胞表面的白介素2受体结合而刺激T细胞的增殖、发育和分化。不同种类的T细胞对IL-2的敏感性不同,调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)对IL-2的敏感性高于其它细胞。所以,低剂量的IL-2可以在不影响效应T细胞(effector T cell,Teff)的情况下,选择性激活Treg信号通路,调节Treg的细胞水平和功能,增强免疫抑制反应,进行免疫调控。目前,低剂量IL-2(low-doses IL-2,LdIL-2)在一些自身免疫疾病治疗研究中得到广泛关注。本文就低剂量IL-2治疗自身免疫性疾病的研究进展作一简要论述。 2019年06月01 00:00 2019年06期 543 1394796 &nbsp;张小娟,苏丽丽,孙 剑 &nbsp;DNA疫苗在自身免疫性疾病中的研究进展 /oa/darticle.aspx?type=view&id=20190614 &nbsp;自身免疫性疾病(autoimmune disease,AID)是一类因机体免疫耐受功能受损而致免疫细胞及其成分对自身组织结构和功能破坏,并出现一定临床表现的疾病。AID发病机制复杂,尚缺乏有效的治疗手段,因而严重影响患者的生活质量。基因疫苗又称DNA疫苗,从wolff等人首次提出至今,已在预防感染、AID及肿瘤等相关领域的研究中取得显著成效。本文就DNA疫苗在AID治疗中的应用及研究进展做一综述,以期为AID的临床治疗提供理论依据。 2019年06月01 00:00 2019年06期 549 870158 &nbsp;滑雅娜,王永福